目的：DNAの特異な配列を認識し切断する酵素を利用して、遺伝子クローンニングに利用する。
方法
反応系
DNA・・・・・・１
酵素・・・・・・２
10×Buffer・・・３
水・・・・・・・４
total・・・・・・５
↓
４→３→１の順で加え、よく混ぜてから最後に２を入れ、tapping
↓
37℃で１時間インキュベート
１． 必要量
２．DNA量から酵素のunit数を考慮して決める。
酵素によってunit数が違うので、カタログやラベルでチェックする。
（１unitとは、反応液50 ul中で至適温度において、１時間に1 ugのDNAを完全に切断する酵素量）
酵素は反応液の1/10～2/10にすること。
グリセロール濃度が高くなって、酵素によってはstar活性で、本来の認識配列とは一部異なる塩基配列で切断されることがある。
Star活性は、高濃度グリセロールのほかに、Mn,DMSO, methylaseの存在、buffer濃度、反応温度によっても生ずることがあるので、酵素の性質はカタログで確認してから使う。
３．Low buffer, medium buffer, high buffer のいずれかをきめる。
それぞれの酵素によって、至適塩濃度があるので、カタログで確認する。４．Total量を水であわせる。
５．酵素から全体量を決める。10 ul～100 ul