マウス胚を取り出し、PBSを入れた24well plateへ入れる（この時ヨークサックは遺伝子型同定のため別にとっておく）

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rotaterで振りながらPBS wash 5min×3（サンプルが大きい時は余分な血液が抜けるまで）

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フレッシュメイドの固定液（1 wellに対して1ml）にてサンプル固定、rotaterにて振りながらRT 15min

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固定液を抜き、後固定のためにとっておく

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PBS wash 30min×3

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フレッシュメイドの染色液にX-gal solnを終濃度1～2γになるよう加える

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各wellに対して1mlの染色液を加えアルミホイルで包み、RT or 37℃でrotate 30min～over night

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適度に染まったところで染色液を抜き、廃液入れへ

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PBS wash 10～30min

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目的によってグリセロールによる透明化を行う

10%グリセロール/PBSから8～12hrおきに20%, 50%, 80%とグリセロールの濃度を上げていく

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保存は4℃


固定液（1mlあたり）
270 ul 10% Formaldehyde
8 ul 25% Glutaraldehyde
2 ul 1M MgCl2
50 ul 0.1M EGTA pH8.0
0.2 ul NP-40
670 ul PBS

染色液（final conc）
5mM K3Fe(CN)6
5mM K4Fe(CN)6
2mM MgCl2
0. 01% Na deoxychorate
0. 02% NP-40
80mM Na2HPO4
20mM NaH2PO4
20mM Tris-HCl pH 7.3

X-gal soln
20 mg/ml in dimethylformamide